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小鼠條件性恐懼模型的建立
小鼠購入后適應(yīng)性飼養(yǎng)6d,實驗當(dāng)天提前1h放入實驗間。不同品系小鼠放入電擊箱內(nèi)(A環(huán)境) 自由探索 2min(適應(yīng)期)后,給與30s聲音刺激 (85dB,5000Hz),后2 s伴隨給與不可逃避的足底 電擊(0.6mA,持續(xù)2s),聲音-電擊共配對5次,每 次間隔2min。計算機軟件記錄各個階段(包括適應(yīng)期、5輪聲音刺激期和5輪間歇期)的僵住時間,僵住 時間百分率(%)=僵住時間(s)/總時間(s)×100%。 僵住行為是嚙齒類動物表達恐懼的方式,表現(xiàn)為除 呼吸運動外全身其余的肌肉運動均消失。
場景恐懼和聲音線索恐懼表達的檢測
場景恐懼表達檢測:條件性恐懼訓(xùn)練24h后, 將小鼠再次置于接受過電擊的裝置(環(huán)境A:足底電 柵欄+白光)中,不給與任何刺激,進行環(huán)境重現(xiàn),使用VisuTrack軟件(上海欣軟)記錄5min內(nèi)的僵住時間(Freezing時間),計算僵住時間百分率,評價小鼠場景條件恐懼表達的特點。
聲音線索恐懼表達檢測:場景恐懼檢測2h后, 將小鼠置于新環(huán)境(環(huán)境B:三角形半透明黑色套 盒+白色底板+無白光)中,2min適應(yīng)期后進行30s聲音刺激,聲音刺激結(jié)束30s后將動物取出,記錄各個階段(包括適應(yīng)期、聲音刺激期和間歇期)的僵住時間,計算僵住時間百分率,用于評價3種品系小鼠線索條件恐懼表達的特點。
條件性恐懼的自然消退
以C57小鼠為研究對象,分別于條件性恐懼訓(xùn)練后第2,7,14,21和28天對其場景恐懼和聲音線索恐懼進行檢測,以評價該品系小鼠條件性恐懼的自然消退特點。其中,場景恐懼檢測5min內(nèi)僵住 時間(環(huán)境A,無聲音信號,不電擊),聲音線索恐懼檢測 30s聲音刺激期內(nèi)僵住時間(環(huán)境B,不電擊, 2min適應(yīng)+30s聲音信號+30s間歇),計算僵住時間百分率。
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聲音線索恐懼消退訓(xùn)練和消退保持測試
以 C57小鼠為研究對象,在條件性恐懼訓(xùn)練(方法見第一段)后24h進行聲音線索恐懼消退訓(xùn)練, 消退訓(xùn)練結(jié)束后24h進行消退保持測試。
消退訓(xùn)練方法:將C57小鼠放入B環(huán)境電擊箱中,適應(yīng) 2min后,采用“30s聲音刺激+30s間歇期"方法給 與10次聲音刺激,計算機軟件記錄適應(yīng)期、10輪聲 音刺激階段和10輪間歇期的僵住時間,計算僵住時 間百分率,作為消退訓(xùn)練成績。
消退保持測試方法:將 C57小鼠放入B 環(huán)境電擊箱中,適應(yīng)2min 后,給與30s聲音刺激1次,刺激結(jié)束30s后將動 物取出,記錄不同階段(適應(yīng)期+30s聲音刺激期+ 30s間歇期)內(nèi)僵住時間并計算僵住時間百分率, 作為消退保持成績。
文章引用(節(jié)選)
中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志2020年2月第34卷第2期,薛瑞,魏肇余,張森品,陳紅霞,李云峰,張有志,《小鼠條件性恐懼模型的建立和品系敏感性研究》